碱性磷酸酶（英语：Alkaline phosphatase，简称ALP或ALKP） (EC 3.1.3.1)是一类水解酶，可在核苷酸、蛋白质、生物碱等分子上去除磷酸基，进行去磷酸化作用，在碱性环境下最为有效，故得名碱性磷酸酶。碱性磷酸酶(ALP）是成骨细胞的一种外酶，它的表达活性是成骨细胞分化的一个明显特征。碱性磷酸酶在机体中的主要生理功能是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟基磷灰石的沉积提供必要的磷酸，同时水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨作用。

碱性磷酸酶对醇，胺，焦磷酸盐和酚的磷酸酯具有广泛的特异性，并且它需要锌和镁或钙二价离子来进行活性。它可用于使酪蛋白和其他蛋白质去磷酸化；也可用于使DNA或RNA的5'-末端去磷酸化以防止自身连接。在用其去磷酸化后，DNA或RNA也可以用放射性标记的磷酸盐（通过T4多核苷酸激酶）标记。它用于与抗体和其他蛋白质缀合，用于ELISA，Western印迹和组织化学检测；通常用于使蛋白质（例如酪蛋白）和核酸去磷酸化。当需要高灵敏度时，它可用于蛋白质标记。

碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。而该脱去磷酸基团的过程被称为去磷酸化或脱磷酸化。碱性磷酸酶是磷酸酶的一种，磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。碱性磷酸酶在碱性环境有最大活力，对来源于细菌中的ALP来说，其最适pH是8.0，而对来源于牛的ALP则是8.5。白色冻干粉或3.2mol/L硫酸铵悬浮液，溶于水和稀缓冲液，pI5.7，最适pH值8.0-10.5(视底物而定)。稳定性：悬浮液于4℃保存6个月，活性不变；冻干粉在氯化钙真空干燥器中于0℃保存一年，活力损失40%。抑制剂有二价金属离子的螯合剂(EDTA、草酸盐、半胱氨酸、组氨酸、柠檬酸)、一乙醇铵、无机磷、Be²⁺、芳香族氨基酸、尿素、碘乙酰胺、L-高精氨酸、高浓度的Zn²⁺。激活剂有Tris缓冲剂、低浓度的Zn²⁺、氨基醇(2-氨基-2-甲基，1-丙醇、二乙醇胺)、二价金属离子(Mg²⁺、Co²⁺、Mn2²⁺)。1%水溶液在278nm处的吸光系数为7.6。酶反应：4-硝基苯磷酸盐+H2O═4-硝基苯酚+无机磷。

碱性磷酸酯酶可用于生化研究，适用于酶免疫测定技术的标记，医药上常用作诊断酶。

以小牛小肠黏膜为原料，匀浆、过滤后酸沉淀，用正丁醇抽提、乙醚和丙酮沉淀，再经活性炭处理精制得碱性磷酸酶。