β-葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中，它可以来源于植物、微生物，也可来源于动物。它的植物来源有人参、大豆等；原核微生物的来源的有脑膜脓毒性黄杆菌(Flavobacterium meningosepticum)、约氏黄杆菌(Flavobacterium johnsonae)等，真核生物来源的有清酒酵母(Candida peltata)、黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)等; 动物来源有蜜蜂、猪肝和猪小肠等。

在饲料工业上，β-葡萄糖苷酶通过破解富含纤维的细胞壁，使其包含的蛋白质、淀粉等营养物质释放出来并加以利用，同时又可将纤维降解为可被畜禽机体消化吸收的还原糖，从而提高饲料利用率。此外，在食品开发上，其作为特殊的风味酶已得到应用，能起到较好的增香效果。

不同来源的β-葡萄糖苷酶，其提取方法也有所不同。动植物体及大型真菌中一般需要对酶源进行组织捣碎，然后用缓冲液浸提。常用的缓冲液有磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等。pH值一般选用酶的稳定pH值；提取温度适于低温，一般为4 °C。利用微生物发酵法生产β-葡萄糖苷酶是它的另一来源，一般微生物发酵都采用液态发酵。对于胞外酶来讲，发酵液即为粗酶液；对于胞内酶，则需对微生物进行细胞破碎，使其释放出β-葡萄糖苷酶。